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CRISPR-Cas9基因編輯實驗中的注意事項

在細胞上做基因研究的一般的過程就是：利用CRISPR-Cas9先做基因除(GeneKnockout)，獲得基因敲除細胞系純合細胞：然后分析相關(guān)的生物學表型；最后做為對照還需要將原敲除的基因回補會到原細胞系中，做為對照細胞進行實驗對比。而利用Cas9進行細胞敲除之后，細胞回補實驗室要注意哪些問題?特別需要考慮的技術(shù)原理是那些？如何規(guī)劃好實驗流程，下面我們就一步步的進一下細胞其因敲除和回補實驗的效率/價格/周期等。一、敲除細胞的方式一般都是純合基因敲除細胞，當然也可以選擇MixC...

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細胞培養(yǎng)基pH值對細胞的影響

細胞培養(yǎng)基pH值對細胞的影響培養(yǎng)基是用來供給細胞營養(yǎng)，促使細胞增殖的，也是細胞賴以生長的環(huán)境。細胞培養(yǎng)實驗中用量最多的就是細胞培養(yǎng)基，雖然細胞培養(yǎng)試驗基本技術(shù)大同小異，但是每種細胞的培養(yǎng)條件卻相差甚遠。若偏離某種細胞所需的培養(yǎng)條件，則會導致細胞表達不同的表型。一、培養(yǎng)基體系主要成分及功能介紹1、葡萄糖：用于細胞能量代謝。2、CO?：細胞需要少量的二氧化碳來維持生長。在培養(yǎng)基中，溶解的CO?與碳酸氫鹽離子處于平衡狀態(tài)，許多培養(yǎng)基利用了這種CO?/碳酸氫鹽反應(yīng)來緩沖培養(yǎng)基的pH值...

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菌種保存常用的五種方法

各種微生物由于遺傳特性不同，因此適合采用的保藏方法也不一樣。一種良好的有效保藏方法，首先應(yīng)能保持原菌種的優(yōu)良性狀長期不變，同時還須考慮方法的通用性、操作的簡便性和設(shè)備的普及性。下面介紹幾種常用的菌種保藏方法：1.斜面低溫保藏法將菌種接種在適宜的斜面培養(yǎng)基上，待菌種生長完成后，置于4℃左右的冰箱中保藏，每隔一定時間（保藏期）再轉(zhuǎn)接至新的斜面培養(yǎng)基上，生長后繼續(xù)保藏，如此連續(xù)不斷。此法廣泛適用于細菌、放線菌、酵母菌和霉菌等大多數(shù)微生物菌種的短期保藏及不宜用冷凍干燥保藏的菌種。放線...

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大腸桿菌分離用什么培養(yǎng)基

培養(yǎng)基作為細胞的“食物”，是細胞培養(yǎng)和發(fā)酵的基礎(chǔ)，大腸桿菌在不同的培養(yǎng)基中培養(yǎng)可能會表現(xiàn)出不同的性狀，而利用這些性狀的不同，可將部分菌種進行區(qū)分或分離，此外，根據(jù)目標菌種選擇合適的培養(yǎng)基可以低成本、穩(wěn)定的高表達。大腸桿菌分離培養(yǎng)基常見的主要有以下幾種：大腸桿菌分離培養(yǎng)基：主要根據(jù)不同的大腸桿菌在培養(yǎng)基中的生產(chǎn)速度，代謝產(chǎn)物，對培養(yǎng)基中特定組分的需求利用情況不同等實現(xiàn)對不同種類的菌種進行分離或篩選。LB固體培養(yǎng)基：是一種主要組分為酵母提取物、胰化蛋白胨、NaCl瓊脂的非選擇性固...

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發(fā)酵工程培養(yǎng)基有哪些

發(fā)酵工程培養(yǎng)基主要使用發(fā)酵培養(yǎng)基：發(fā)酵培養(yǎng)基是指為了在生產(chǎn)中更加利于菌種代謝產(chǎn)物的生成而設(shè)計的培養(yǎng)基，這類培養(yǎng)基常見的主要有以下幾種：SOB（SuperOptimalBroth）培養(yǎng)基：是一種富營養(yǎng)培養(yǎng)基，其配方為：2%胰蛋白胨,0.5%酵母提取物,10mMNaCl,2.5mMKCl,10mMMgCl2,10mMMgSO4。與LB培養(yǎng)基相比，SOB培養(yǎng)基中含有兩倍多的蛋白胨，富含更多的氨基酸及多肽。此外，SOB培養(yǎng)基中含有鎂離子，鎂離子是高密度培養(yǎng)必須的離子。利用SOB培養(yǎng)基...

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